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PCR

来源:网络 时间:2008-4-28 15:21:00 点击:-
       Kary Mullis因利用细菌的DNA复制酶在体外进行DNA扩增而发明了PCR技术,并由此获得1993年的诺贝尔奖。今天,PCR不但用于科学研究当中,而且在实验室、临床、医院的遗传检测以及分析DNA证据的法医实验室等各方面都有实际应用。为了使PCR的特异性增强或者减弱,对PCR程序进行了许多改造,在遗传学领域PCR有很多重要的应用价值。PCR能使特异的DNA序列进行复制。PCR反应需要以下材料:
  1. DNA膜板:所获得的DNA样本
  2. 核苷酸碱基:ATGC
  3. DNA聚合酶:DNA复制的酶
  4. 引物对:人工合成的与欲扩增DNA区域两侧序列互补的短片段特异性DNA序列。同时它也有助于聚合酶与DNA结合和功能的正常发挥
  5. 反应缓冲液
  6. 盐溶液

    PCR的程序开始于在核苷酸(ATCG)、一对引物、聚合酶、缓冲液和盐溶液存在的情况下对样品DNA进行加热,使DNA分子变性,两条链分开。然后使样品冷却,引物此时与每条链杂交,使DNA聚合酶开始DNA复制。随着聚合酶在DNA模板链上的移动,核苷酸碱基加上去,形成与 模板DNA互补的拷贝。然后,对样品再一次加热使DNA变性,从而开始了一个新的循环。这种循环在DNA扩增仪里重复20-30次,使样品DNA上两侧引物区内的DNA片段扩增的数目呈指数增长。

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