根据个体的基因组序列,用限制性核酸酶对DNA消化,产生不同长度的DNA片段。例如,某一个体的DNA上具有Hind Ⅲ的切割序列AAGCCT,这种酶会在出现上述序列的位置将DNA切割成许多片段。因此,如果嫌疑人S1有50个限制性(即切割)位点,而嫌疑人S2有55个限制性位点,这两个个体的DNA片段将产生不同的带型。每条片段的大小取决于限制性位点之间的距离。这种片段数量和大小的差异通常称作多态性,是由于所切割的DNA的多种形态造成的。 | ||
DNA图象的获得,动物、植物、微生物DNA的图象可通过对DNA的分析而得到。简化的方法可包括以下七步: | ||
1、 |
收集生物样品:血液、唾液、精液、头发、牙齿、骨骼以及其他来自个体的细胞组织或液体。 | |
2、 |
DNA提取:从样品中分离DNA。根据方法的不同,少量样品就足够了,如从个体帽子上发现的前额皮肤的脱落细胞。或者在电话上留下的唾液滴甚至在邮票上也能留下足够的可供分析的DNA。 | |
3、 |
DNA消化:下一步是用限制性核酸酶对DNA切割。其中Hind Ⅲ、EcoR I是经常使用的酶。在DNA用限制性酶处理后,产生一系列大小不同的片段。 | |
4、 |
片段分离:通过电泳对DNA进行片段大小分离。这一过程包括把DNA溶液点样入凝胶,并放入电泳槽。通常选用琼脂糖凝胶电泳。琼脂糖是一种从海藻中提取的物质,而海藻的成分与明胶相似。将DNA点样在靠近负极的胶中的小孔里,电场使DNA片段从负极向正极移动。小DNA片段比大DNA片段泳动要快,从而使大小片段分开。 |
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5、 |
DNA转移:DNA片段分离完毕,通过毛细作用将其转至尼龙膜上当这些片段吸附到膜上后就可以通过一定操作使其日后能观察到。 | |
6、 |
与探针杂交:将萤光素或同位素标记过的探针加到尼龙膜上,与探针互补的DNA片段可显示出来。每个探针可使膜上几个典型的片段显示出来。 | |
7、 |
DNA图象:在用不同的探针与膜杂交后可获得最后的DNA图象。这种图象就是不同大小的条带(亮点)带型(见右图)。 |